复方管花肉苁蓉片抗疲劳作用研究

倪慧，张娟，卿德刚，贾晓光

（新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，中国医学科学院药用植物研究所新疆分所，乌鲁木齐   ８３０００２）

摘要：目的   考察复方管花肉苁蓉片缓解体力疲劳的作用。 方法   ＳＰＦ 级昆明种雄性小鼠１６０ 只，体质量１８～２２ｇ。根据人体推荐量，设复方管花肉苁蓉片低、中、高剂量（０．１６７、０．３３３、１．０００ｇ／ｋｇ·ｂｗ）组和正常对照组，在给予受试物３０ｄ后测定各组小鼠的负重游泳持续时间、血清尿素、肝糖原含量变化以及血乳酸水平（游泳前、游泳后０ ｍｉｎ、游泳后２０ ｍｉｎ值）。 结果 １．０００ｇ／ｋｇ·ｂｗ 剂量的复方管花肉苁蓉片能明显延长小鼠的负重游泳时间，增加小鼠肝糖原储备量，降低小鼠运动后血清尿素水平，与对照组比较差异有统计学意义 （Ｐ ＜０．０５），各剂量复方管花肉苁容片对小鼠血乳酸曲线下面积未见明显影响 （Ｐ ＞０．０５）。结论   复方管花肉苁蓉片具有抗疲劳的作用。

关键词：管花肉苁蓉；抗疲劳作用；动物实验

中图分类号：Ｒ２８２．７５文献标识码：Ａ文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０７－０８６７－０４

管花肉苁蓉为列当科植物管花肉苁蓉Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｃｈｒｅｎｋ．）Ｒ．Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎［１］，寄生于柽柳，主产于新疆和田、阿克苏地区，其具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效，常用于治疗男子阳痿、女子不孕、血崩、带下、腰膝冷痛、筋骨无力、血枯便秘等症［２］。现代药理学研究表明，其具有提高肾功能、抗疲劳、降血压、抗衰老、调节免疫等多方面的药理作用［３－４］。管花肉苁蓉的主要有效化学成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、寡糖脂类等［５－７］。复方管花肉苁蓉片主要以管花肉苁蓉为原料，配以刺五加、西洋参等制成，含量测定指标以管花肉苁蓉中的松果菊苷和麦角甾苷为主。本实验以不同剂量的复方管花肉苁蓉片灌胃小鼠，通过负重游泳试验和测定小鼠的生化指标，研究复方管花肉苁蓉片抗疲劳的作用，为开发其保健品提供科学依据。

１材料与方法

１．１药物复方管花肉苁蓉片由新疆博远欣绿生物科技有限公司提供，人体日服用量２ｇ，每克制剂中相当于含有管花肉苁蓉原药材２．４ｇ。

１．２实验动物与分组ＳＰＦ级昆明种雄性小鼠

１６０只，体质量１８～２２ｇ，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，实验动物生产许可证号为ＳＣＸＸ（湘）２００９－００１２，饲料由同一单位提供。将小鼠分为４组，每组４０只，每组再随机分为正常对照组及复方管花肉苁蓉片低、中、高剂量组，每组１０只。

１．３剂量选择及样品处理根据人体推荐量，设复方管花肉苁蓉片低、中、高剂量（０．１６７、０．３３３、１．０００ｇ／ｋｇ·ｂｗ）组，按组别给予小鼠不同剂量，灌胃体积０．２ｍＬ／１０ｇ·ｂｗ。对照组予以等体积的蒸馏水，每天１次，连续３０ｄ。

１．４仪器与试剂ＯＬＹＭＰＵＳＡＵ４００全自动生化分析仪，ＳＢＡ４０Ｃ生物传感分析仪，７２２分光光度计，游泳箱（５３ｃｍ×４０ｃｍ×３５ｃｍ），铅皮，计时器，血色素吸管，加样器，吸量管，试管。血清尿素测试盒（上海复星长征医学科学有限公司），肝糖原测试盒（南京建成生物工程研究所）。

１．５实验方法

１．５．１负重游泳试验末次给小鼠受试物３０ｍｉｎ后，置于游泳箱中游泳，水深３０ｃｍ，水温（２５±１）℃，鼠尾根部负荷５％重量的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，以其作为负重游泳时间。１．５．２血清尿素、肝糖原、血乳酸的测定末次给小鼠受试物３０ｍｉｎ后，分别测定血清尿素、肝糖原和血乳酸。在温度为３０℃的水中不负重游泳９０ｍｉｎ，休息６０ｍｉｎ后拔眼球采血，于４℃静置３ｈ后２０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取血清，全自动生化分析仪测定血清尿素；处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，称取肝脏１００ｍｇ，按试剂盒说明书进行肝糖原测定；从内眦静脉丛采血２０μＬ，在温度３０℃的水中不负重游泳１０ｍｉｎ后停止，分别于运动后０～２０ｍｉｎ从内眦静脉丛采血２０μＬ，测定血乳酸，计算血乳酸曲线下面积。血乳酸曲线下面积＝１／２×（游泳前血乳酸值＋游泳后０ｍｉｎ的血乳酸值）×１０＋１／２×（游泳后０ｍｉｎ的血乳酸值＋游泳后休息２０ｍｉｎ的血乳酸值）×２０。

１．６统计学处理采用ＳＰＳＳ１５．０统计软件包对数据进行处理，分析时先进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Ｄｕｎｎｅｔｔ法进行多个剂量组与对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Ｔａｍｈａｎｅ’ｓ检验进行两两比较［８］。

１．７结果判定负重游泳试验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原３项生化指标中任２项指标阳性，即可判定受试物具有缓解体力疲劳的作用。

２结果

２．１复方管花肉苁蓉片对各组小鼠不同时期体质量影响复方管花肉苁蓉片低、中、高剂量组小鼠实验初始、中期、末期体质量与对照组比较，差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。

２．２复方管花肉苁蓉片对小鼠游泳时间、血清尿素、肝糖原储备量的影响与对照组比较，复方管花肉苁蓉片高剂量组小鼠负重游泳时间延长，血清尿素低于对照组，肝糖原储备量明显高于对照组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表１。

２．３复方管花肉苁蓉片对小鼠血乳酸的影响复方管花肉苁蓉片各剂量组小鼠游泳前、后及游泳后休息２０ｍｉｎ后血乳酸值、血乳酸曲线下面积与对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表２。

３结论

管花肉苁蓉因其显著的药理活性在新疆民间有广泛的应用，是开发保健食品的良好原料。本课题组就以管花肉苁蓉为主要原料开发了具有抗疲劳作用的保健食品，并根据《保健食品检验与评价技术规范》［９］考察了其缓解体力疲劳的作用。本研究经口分别给予小鼠０．１６７、０．３３３、１．０００ｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量的复２．５致畸试验各剂量组孕鼠及胎鼠的各项指标及死胎率与对照组相比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；各组胎鼠内脏检查均未发现有畸形，但各剂量组和对照组动物骨骼检查均发现个别胎鼠胸骨骨化不全。根据ＧＢ１５１９３－２００３中的致畸试验评价标准判定，各剂量组未发现有致畸作用。

３结论

为了给管花肉苁蓉相关产品开发提供更充分的依据，本研究对管花肉苁蓉提取物的安全性进行了评价，急性经口毒性试验表明管花肉苁蓉提取物最大耐受剂量（ＭＴＤ）＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ，属实际无毒物；苁蓉提取物有较好的安全性，可以用于保健食品的开发。

参考文献：

［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．２０１０年版．北京：化学工业出版社，２０１０：１２６．

［２］侯志华，常国文．肉苁蓉的药理学研究进展［Ｊ］．中国民族医药杂志，２００３，９（４）：３－４．

［３］金秀莲，张庆荣．肉苁蓉化学成分研究进展［Ｊ］．中国中药杂志，１９９４，１９（１１）：６９５－６９７．

［４］李勇，熊元君，贾晓光，等．管花肉苁蓉提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００９，２１（５）：２２０－２２２