管花肉苁蓉药渣中多糖含量测定及抗氧化活性研究

杨婷，艾拉旦·麦麦提艾力，陶义存，姚军（新疆医科大学药学院，乌鲁木齐８３００１１）

管花肉苁蓉药渣中多糖含量测定及抗氧化活性研究杨婷，艾拉旦·麦麦提艾力，陶义存，姚军（新疆医科大学药学院，乌鲁木齐８３００１１）摘要：目的测定管花肉苁蓉药渣中多糖含量及其抗氧化活性。方法采用水提醇沉法提取管花肉苁蓉药渣中多糖成分，采用蒽酮硫酸法测定含量，利用二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ）、羟自由基（·ＯＨ）以及铜离子还原能力清除实验综合评价管花肉苁蓉药渣中多糖的体外抗氧化活性，通过红外光谱对多糖进行初步结构鉴定。结果管花肉苁蓉药渣中多糖含量为０．０２５ｍｇ／ｇ，当多糖浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ时，对ＤＰＰＨ自由基清除率为５９％，Ｖｃ的清除率为８９％，当多糖浓度为０．０３μｇ／ｍＬ时，对铜离子还原能力为６４％，Ｖｃ的还原能力为８８％，当多糖浓度为０．０１５ｍｇ／ｍＬ时，多糖对羟自由基清除率为７０％，Ｖｃ的清除率为７０％。红外光谱分析表明管花肉苁蓉药渣中多糖提取物中含有α多糖。结论管花肉苁蓉药渣中多糖含量较高，具有抗氧化活性。

关键词：管花肉苁蓉；多糖；红外光谱；抗氧化活性

中图分类号：Ｒ９１４文献标识码：Ａ文章编号：１００９５５５１（２０１９）０２０２３４０４

dol：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９５５５１．２０１９．０２．０２２

管花肉从蓉为列当科肉苁蓉属植物，主产于我国新疆，在于田、民丰县有大面积栽培，具有补肾精、益精血、润肠道的功效［１－３］。研究表明管花肉苁蓉中含有苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、多糖类及生物碱类等多种生物活性成分［４］，具有抗氧化、增强机体免疫力、保护肝脏、改善大脑记忆力等药理作用［５－９］。本研究采用水提醇沉法提取管花肉苁蓉药渣中的多糖成分，采用蒽酮硫酸法测其多糖含量，运用红外光谱技术对多糖结构进行初步鉴定，通过３种抗氧化模型测定多糖的抗氧化活性，现报道如下。

1材料与方法

１．１仪器ＦＡ１００４型分析天平（上海友声衡器有限公司），Ｔ６新世纪型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），ｔｉｇｅ２１型红外分光光度计（日本岛津公司）。

１．２试剂无水葡萄糖（天津市永大化学试剂有限公司，批号：２０１３０２２５），９５％乙醇（天津市富宇精细化工有限公司），蒽酮（国药集团化学试剂有限公司，批号：２０１７０４２０），浓硫酸，二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ，上海梯希爱化成工业发展有限公司），新亚铜（上海梯希爱化成工业发展有限公司），醋酸铵（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１３０４１２），硫酸铜（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１４１１０３），氢氧化钠（天津永晟精细化工有限公司），过氧化氢（天津市盛奥化学试剂有限公司），试剂均为分析纯。

１．３药材管花肉苁蓉药渣２０１８年５月购买于新疆金骏阳光生物科技有限公司。

１．４方法

１．４．１管花肉苁蓉中药渣中多糖提取方法将管花肉苁蓉药渣粉碎，用９５％乙醇回流脱脂，在８０℃的条件下按照料液比（１∶１０）回流提取２次，每次２ｈ，在８０℃的条件下合并滤液浓缩，用９５％乙醇醇沉，４℃过夜。

１．４．２多糖含量测定方法称取葡萄糖样品２０．０ｍｇ于５０ｍＬ容量瓶中，制成０．４ｍｇ／ｍＬ的葡萄糖标准溶液，分别吸取３、４、５、６、７ｍＬ置于５０ｍＬ容量瓶，定容至刻度，分别吸取各个浓度梯度的葡萄糖溶液２．０ｍＬ于试管中，另取等量蒸馏水作空白对照，在各管加入０．２％硫酸蒽酮（称取０．１ｇ蒽酮加入５０ｍＬ浓硫酸）４．０ｍＬ，用沸水加热１５ｍｉｎ，取出用冷水冷却至室温，在６２０ｎｍ处测其吸光度值，以吸光度（犃）为纵坐标（犢），葡萄糖浓度（犆）为横坐标（犡），绘制标准曲线，得回归方程犢＝１６．４５犡－０．２０２４（犚２＝０．９９１１）。吸取管花肉苁蓉药渣中粗多糖溶液２．０ｍＬ于１０ｍＬ具塞试管中，按上述方法测定样品溶液中多糖含量。

１．４．３红外光谱分析将多糖与溴化钾按１∶１００的比例均匀混合，充分研磨，取适量用压片机压片，在４０００～４００ｃｍ－１范围内进行红外光谱扫描，对多糖结构进行初步鉴定。

１．４．４管花肉苁蓉药渣中多糖的抗氧化活性研究

１．４．４．１ＤＰＰＨ自由基清除能力测定称取４０ｍｇＤＰＰＨ试剂，用无水乙醇溶解定容于２５０ｍＬ容量瓶内，配置成浓度为２×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的溶液。取５支具塞试管依次加入不同浓度的样品溶液各２ｍＬ及２×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ溶液，加入１ｍＬ无水乙醇使反应总体积为５ｍＬ，摇匀，避光放置３０ｍｉｎ，在５１７ｎｍ处测定吸光度（Ａｉ），按公式ＤＰＰＨ清除率／％＝Ａ０－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０×１００％（式中：Ａ０为无水乙醇２ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ｍＬ＋无水乙醇１ｍＬ时的吸光度值；Ａｊ为无水乙醇２ｍＬ＋待测样品２ｍＬ＋无水乙醇１ｍＬ时的吸光度值；Ａｉ为待测样品２ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ｍＬ＋无水乙醇１ｍＬ时的吸光度值）计算清除率，以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３次，求平均值。

１．４．４．２铜离子还原能力测定取０．５ｍＬ不同浓度的样品液，分别加入０．０１ｍｏｌ／ＬＣｕＳＯ４和７．５ｍｍｏｌ／Ｌ新亚铜试剂各０．１２５ｍＬ混合，再加入０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ值为７．０的ＮＨ４Ａｃ缓冲液至总体积为１．０ｍＬ，摇匀，静置３０ｍｉｎ，在４５０ｎｍ波长处测定吸光度，按公式相对总还原百分率／％＝（Ａ－Ａ０）／（Ａｍａｘ－Ａ０）×１００％（式中：Ａ０为不加样品时的吸光度值；Ａｍａｘ为在系列样品溶液中溶液浓度最高时的吸光度值；Ａ为样品在４５０ｎｍ处的吸光度值）计算还原百分率。以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３次，求平均值。

１．４．４．３羟自由基清除能力测定取５支具塞试管依次向其中加入２．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＦｅＳＯ４溶液２．０ｍＬ，１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２２．０ｍＬ，振荡，摇匀，再加入６．０ｍｍｏｌ／Ｌ水杨酸３．０ｍＬ，摇匀，于３７℃水浴加热１５ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处测定吸光度（Ａ０），然 后分别向 ５ 支试管中加入待测样品 ０．２、０．４、０．６、 ０．８、１．０ ｍＬ，再分别加入超纯水０．８、０．６、０．４、０．２、 ０ｍＬ，摇匀，３７℃下水浴加热１５ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处 测定吸光度（ＡＸ），按公式·ＯＨ 自由基清除率／％ ＝（Ａ０－ＡＸ）／Ａ０ ×１００％计算清除率。以 Ｖｃ为阳 性对照，每组实验重复３次，求其平均值。

２ 结果

２．１ 管花肉苁蓉药渣中多糖的含量 按“１．４．２”项下 方法测定管花肉苁蓉药渣中多糖含量为０．０２５ｍｇ／ｇ。

２．２ 管花肉苁蓉药渣中多糖结构分析 在４０００～ ６５０ｃｍ－１有多糖类物质的特征吸收峰，在３５００～ ３２００ｃｍ－１处 有 １ 个 强 和 宽 的 吸 收 峰，为 多 糖 上 ·ＯＨ的吸收峰。在２９１０ｃｍ－１处出现的峰为 ＣＨ 的变角振动，和 ＣＨ 伸缩振动形成的糖类特征吸收 峰。在１６０４ｃｍ－１ 处 出 现 的 峰 为 ＣＯ 吸 收 峰，在 ８４０ｃｍ－１处出现的峰为α型糖苷键的特征吸收峰， 说明提取物为α多糖。以波数为横坐标，透过 率为纵坐标绘制红外光谱图，见图１。