肉苁蓉总苷对β-淀粉样肽所致阿尔采末病小鼠模型学习记忆的影响及其机制

刘凤霞1,王晓雯2,罗兰2,新华那比2,王雪飞2

(新疆医科大学1.基础医学院解剖学教研室、2.药学院药理学教研室,新疆乌鲁木齐830054)

中国图书分类号:R-332;R 282.71;R 284.1;R 329.25;

R 338.64;R 745.705.3;R 977.6

文献标识码:A文章编号:1001-1978(2006)05-0595-05

摘要:目的研究肉苁蓉总苷(G lycosides o f c istanche,G Cs)对β-淀粉样肽(β-AP)所致阿尔采末病(AD)模型小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用小鼠脑室内一次性微量注射β-A P25-35诱发β-AP在脑内的沉积,造成AD小鼠模型。10 d后,一次性训练被动回避跳台实验测定AD小鼠学习记忆能力;检测脑组织SOD活性、M DA含量及G SH-P x活性;电子显微镜检测脑组织神经细胞的病理变化;TUNEL法检测脑细胞凋亡;免疫组化SA BC法检测Bax/Bc-l 2的表达。结果GC s可提高β-AP所致AD小鼠学习记忆水平;降低脑组织M DA含量,提高SOD及GSH-P x活性;使脑组织中某些病理改变得到改善;降低脑细胞凋亡率;使Bax的表达减弱,Bc-l 2的表达增强。结论G Cs对β-淀粉样肽所致AD小鼠学习记忆能力提高,其作用机制可能与其增强自由基清除酶活性,防止脂质过氧化作用,抑制β-AP在脑内的沉积及抑制脑细胞凋亡有关。

关键词:肉苁蓉总苷;阿尔采末病;β-淀粉样肽;自由基;细胞凋亡

阿尔采末病(AD)是老年期发生的一种以进行性认知障碍和记忆损害为主要特征的脑退行性疾病。其病理改变以老年斑(SP)、神经纤维缠结(N FT)和神经元的丢失为主要特征[1]。由于其病因及发病机制不清,目前尚缺乏肯定有效的治疗手段。

研究发现AD患者脑内细胞外沉积的凝聚态的β-淀粉样肽(β-am y loid peptide,β-A P)具有神经毒,可引起动物学习记忆减退和认知功能障碍,还可出现神经退化和死亡[2]。因此,此模型常用于AD发病机制的研究和药物筛选工具。肉苁蓉(herba cistanch-es)俗名大芸,为列当科植物,是一味著名的补益中药,具有补肾阳,益精血,润肠通便,抗衰老,抗氧化等方面功效[3]。肉苁蓉总苷(g lyco sides o f cistanche,GC s)是从新疆南疆管花肉苁蓉中提得,主要成分是苯乙醇总苷。本课题组多年来已对GC s的抗氧化[4],清除自由基[5],抗衰老[6]等药理作用进行了深入的研究。本文旨在研究GC s对β-A P造成的AD小鼠的学习记忆的影响,并探讨其作用机制。

1材料与方法

1.1药品与试剂肉苁蓉总苷,由新疆医科大学药学院植物化学室按日本文献〔公开特许公报(A)昭63-198627〕方法,从南疆管花肉苁蓉中提得,主要成分是苯乙醇苷类;β-AP25-35购自S igm a公司,以灭菌生理盐水溶解,浓度为1.0 mmo l L,密封后放37℃培养箱中1 wk;维生素E系上海建安制药厂生产;考马斯亮蓝、MDA、SO D、GSH-Px测试试剂盒,购自南京建成生物工程研究所;细胞凋亡原位检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品。Bax(P-19)、B cl-2(N-19)兔抗鼠多抗系美国Santa C ruz B iotechnology公司产品,SABC免疫组化染色试剂盒系武汉博士德生物有限公司产品,DAB购自S igm a公司。

1.2模型制备及试验分组:

1.2.1模型制备N IH小鼠,♂,体重(22±2)g,由新疆医科大学实验动物中心提供(合格证:医动字:第16-003号)。小鼠用水合氯醛(400 mg kg)腹腔注射后,以75乙醇消毒后在其双耳前缘连接线中点偏右1 mm处用微量注射器垂直注入凝聚态的β-A P 2μl,对照组注入等量生理盐水,注入时间2 m in,留针2 m in,起针局部消毒后缝合皮肤。

1.2.2试验分组采用分层随机法随机将动物分为6组:①生理盐水对照组(假手术组);②β-淀粉样肽组(模型组);③维生素E组:(阳性对照组)50 m g kg;④GC s不同剂量组:62.5、125、250 m g kg。于造模手术前7 d开始灌胃给药,假损伤组及模型组给蒸馏水,每天1次,共17 d。