苁蓉总苷对乙醇诱导小鼠学习记忆再现缺失的影响

王传社1 李寅增2 宋志宏3 李秀琴4 屠鹏飞5

(1,北京大学中医药现代研究中心基础医学院100083; 2,北京大学中医药现代研究中心100083; 3,北京大学中医药现代研究中心药学院100083; 4,北京大学公共卫生学院 100083; 5,北京大学中医药现代研究中心药学院 100083）

摘要：目的: 观察苁蓉总苷对乙醇所致小鼠学习记忆再现缺失的影响。方法: 使用水迷宫法观察小鼠的学习记忆功能。对经过训练优选的小鼠连续灌胃给予苁蓉总苷 7 天，给药的同时进行训练，给药第 6 天的成绩作为给乙醇前成绩，第 7 天进行测试，测试前 30 分钟灌胃给予乙醇，记录反应时间、

错误次数和每组错误只数。结果 1 ）各组动物给予乙醇前水迷宫的反应时间基本一致，各组间没有显著性差异，错误次数及只数均为 0 。2 ）给予乙醇后，模型组反应时间明显延长、错误次数及只数明显增加。3   ）给予乙醇后，苁蓉总苷各剂量组及阳性组反应时间及错误次数和只数均少于模型组， 但仅有中剂量组有显著性差异；且中剂量组的作用亦明显优于低剂量组，而阳性组与高剂量组的作用强度相当。结论苁蓉总苷对乙醇诱导的小鼠学习记      忆再现缺失有明显的保护作用，并呈现剂量依赖性。

关键词：苁蓉总苷；学习记忆功能；水迷宫

随着社会人口的老龄化，老年痴呆症发病率呈不断上升的趋势，已成为老年人群继心脏病、肿瘤、中风之后的第四大死因，寻找安全有效的离治老年痴呆症药物已成为当今药物研究的热点领域之一。中医认为，老年痴呆症多属虚症，肾精亏损、心脾两虚，而髓海空虚，痴呆。近年来，中医学使用以补肾益髓为主，兼补心脾的方法治疗老年痴呆症取得了较大的进展。

中药肉苁始载于《神农本草经》，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，主治男子阳痿、女子不孕、腰膝冷痛、血枯便秘等证。现广泛应用于治疗老年性痴呆、阳痿、男子不育症、老年性多尿、习惯性便秘等病症［1,2］。动物实验也表明肉苁蓉确有抗痴呆作用［3］。肉苁蓉属植物主要含苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素苷类、半乳糖醇和甜菜碱等成分［4］，药理活性研究表明，苯乙醇苷类为其主要有效成分，具有抗氧化、抗缺氧、抗辐射、增强免疫功能等作用［5,8］。苁蓉总苷为管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight的干燥肉质茎中提取精制的苯乙醇总苷，含苯乙醇苷类90.7%，主要有效成分松果菊苷(echinacoside)44.3%。为了将其开发成为促智和防治老年性痴呆症的新药，我们对其进行了有关提高学习记忆功能和抗老年痴呆症的药效学试验，作为有效部位新药，目前已完成Ⅰ~Ⅲ期临床试验，即将取得新药证书。本文报道了苁蓉总苷对乙醇诱导的小鼠学习记忆再现的影响。

1，材料与方法

1.1，动物

健康的雄性LACA系小白鼠120只，体重（38

±3.5）g，由北京医科大学实验动物科学部提供，合格证号为医动字第01-1054号。动物饲养在北京医科大学实验动物科学部饲养室，合格证号为医动字第01-2055号。

1.2，药物与试剂

苁蓉总苷,从管花肉苁蓉提取的苯乙醇总苷，含苯乙醇总苷90.7%、松果菊苷(echinacoside)44.3%，深褐色粉末,由北京医科大学药学院天然药物学系提供,批号为980601。脑复康(吡拉西坦片),0.4g/片，石家庄新华制药厂生产,批号为981104。前述两药用前以蒸馏水配所所需浓度。分析纯无水乙醇，石家庄市有机化工厂生产，为批号为980305，用时以蒸馏水稀释成30%乙醇溶液。

1.3，仪器

参照日本国立卫生试验所药理部后代影响研究室的水迷宫装置［8］自行制造。

1.4，方法［9,10］

1.4.1训练：将小鼠放在起点开始水迷宫训练，水温（20±1)℃，测定反应时间(小鼠从水迷宫起点游不能超过终点安全台所需时间)，同时记录每只小鼠洲入盲端的错误次数和每组出现错误的动物只数，每天上午训练1次，每次每只小鼠重复训练四次。

1.4.2,分组及给药：训练7天后优选55只小鼠用于本次试验，55只小鼠按体重随机分为5组，每组10~12只，分别是模型对照组、阳性对照组(简称阳性组，脑复康400mg/kg)以及苁蓉总苷低剂量组(50mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)、高剂量组(400mg/kg)。继续训练6天，每天于训练后灌胃给药，每日1次，0.2ml/10g体彼一时，连续给药7天，模型组给予等体积的蒸馏水。

1.4.3,测试：以给药第6天的各项检测值作为训练后成绩(给乙醇前成绩)。实验前禁食给水过夜。各组经口给药后1小时，经口给予30%乙醇0.1ml/10g体重。给乙醇后30分钟，用水迷宫法测定各组小鼠从迷宫起点游至终点安全台所需时间(反应时间)和途中进入盲端的错误次数及只数作为各组的测试成绩(给乙醇后成绩)，每鼠重复测定四次，计算平均值。

1.5，统计处理

结果均以x±s表示，用组间比较的t检验对反应时间进行统计学处理。各组间错误次数和只数使用X2检验其差异显著性，以P<0.05为有显著性差异。

表1苁蓉总苷对乙醇诱导的学习记忆再现缺失模型小鼠的保护

注：t检验：与模型组比较**P<0.01；与200mg/kg组比较▲P<0.05；与给乙醇前比较◆◆<0.01x 2检验：与模型组比较★★P<0.01

各组动物给予乙醇前水迷宫的反应时间相近,各组间没有显著差异，错误次数及只数均为0。给予乙醇后，模型组反应时间明显延长、错误次数及只数明显增加，显示小鼠已出现学习记忆再现功能缺失，模型复制成功。给予乙醇后，苁蓉总苷各剂量组及阳性组反应时间、错误次数和只数以及平均错误率均少于模型组，仅中剂量组模型组间有显著性差异;中剂量组的保护作用明显优于低剂量组；而阳性组与高剂量组的保护作用相当。表明苁蓉总苷对乙醇诱导的小鼠学习记忆再现缺失有明显的保护作用，并有明显的剂量依赖关系，在等剂量作用下苁蓉总苷的保护作用优于脑复康，但两组间无显著性差异。

4，讨论

学习记忆是脑的高级功能,是构成智能的要素。在学习记忆的整个神经活动中,可分为获得、巩固再现3个基本神经过程。学习记忆障碍是多种脑病所共有的平状，发生率较高，病因多种多样，如儿童期的多动症、青年期的舞蹈病、脑叶萎缩症、神经衰弱以及老年期的脑血管硬化、脑供血不足、痴呆等。检测学习记忆功能的实验方法有多种，如跳台法、避暗