苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响研究

胡余明, 胡怡秀, 刘秀英, 马征, 易传祝

【摘要】   目的   观察苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响。方法   使用水迷宫实验、跳台法、避暗法重复2 次检测正常小鼠学习记忆水平。结果2 次实验结果显示苁蓉总苷可以明显降低水迷宫实验到达终点的时间,   2 min 内到终点的动物数显著增多;可以使跳台的潜伏期明显延长,   5 min 内的错误次数明显减少。结论   苁蓉总苷可以提高正常小鼠的学习记忆功能。

【关键词】苁蓉总苷;正常小鼠;学习记忆功能

随着我国人口的老龄化以及脑血管疾病的增加,老年痴呆症的发病率呈不断上升的趋势。再加上现代社会激烈的竞争,每个人压力都很大,导致记忆减退、疲劳综合征的发病率快速增长。如何预防老年痴呆症,如何防止记忆力减退成为各国科学家们关心的课题。肉苁蓉提取物(苁蓉总苷)近年来逐渐成为人们关注的重点,肉苁蓉始载于《神农本草经》,味甘、咸,性温,具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效,现广泛用于治疗老年性痴呆、阳痿、习惯性便秘等病症〔1,2〕。现代药理学表明,肉苁蓉具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能,苁蓉总苷是从管花肉苁蓉的干燥肉质茎中提取精制而成〔3-6〕。本研究观察了苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响,为其开发成为防止老年痴呆症的新资源提供依据。

1材料和方法

1.1动物

南华大学实验动物学部〔实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2004-0009〕提供的雄性清洁级昆明种小鼠2批,每批120只,体重18～23 g。

1.2样品

由某药业有限公司提供,棕色粉末。

1.3实验环境条件

环境温度21～24℃,湿度56～58。

1.4剂量选择及受试物给予方式

每批小鼠分为3大组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),每大组40只动物,Ⅰ组进行避暗实验,Ⅱ组进行水迷宫实验,Ⅲ组进行跳台实验。每大组按动物体重排序后随机分为对照组、低、中、高剂量组,每组10只小鼠。据人体口服推荐量,设苁蓉总苷低、中、高剂量分别为

0.113 g/kg bw、0.225 g/kg bw、0.675 g/kg bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。低、中、高剂量受试液配制时分别取样品1.13 g、2.25 g、

6.75 g加蒸馏水至200 ml,按0.2 ml/10 g bw体积给小鼠灌胃,对照组灌胃予以等体积蒸馏水,每天1次,连续30 d。

1.5主要仪器

水迷宫、避暗仪、跳台仪。

1.6实验方法

1.6.1跳台实验:小鼠按1.4给予受试物30 d后进行跳台实验:将动物放入反应箱内适应3 min,立即通以36 V交流电刺激小鼠。然后将小鼠放在绝缘平台上,记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、5 min内每鼠受到电击的次数(跳下平台的错误次数)和各组跳下平台的动物数,以此作为学习成绩。24 h后重复测验,记录第一次跳下平台的潜伏期、3 min内跳下平台的错误次数和各组跳下平台的动物数。停止训练

5 d后进行消退实验。

1.6.2避暗实验:小鼠按1.4给予受试物30 d后进行避暗实验:记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间(潜伏期)、5 min内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。24 h后同一时间,再进行测验,记录每鼠进入暗室的潜伏期、5 min内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。停止训练5 d后进行消退实验。

1.6.3水迷宫实验:小鼠按1.4项给予受试物30 d后进行水迷宫实验,训练期间继续给予受试物。每天训练1次,连续5 d。第一天训练前将小鼠放在梯子附近,使其自动爬上3次,以后每次训练前将小鼠放在梯子附近,使其自动爬上1次。第一天训练时,用挡板在A处挡死,从A点开始进行训练;第二天从B处开始,此路程训练3 d,至80的动物在2 min内到达终点;第5天从起点开始训练;最后以5 d的总学习成绩进行评价(即各组5 d到达终点的总时间、总错误次数和各组2 min内到达终点的动物数)。停止训练5 d后进行消退实验。

1.7实验数据统计

水迷宫实验中到达终点的时间、跳台实验和避暗实验中的潜伏期、错误次数属计量资料,可用方差分析,但需先进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析进行总体比较,发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换,满足方差齐性检验后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到方差齐的目的,改用秩和检验进行统计,发现总体比较有差异,则采用不要求方差齐性的Tamhane′s T2检验进行两两比较。到达终点的动物数(百分率)为计数资料,用χ2检验,四格表总例数小于40,或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时,改用确切概率法。

2结果

2.1苁蓉总苷对小鼠水迷宫实验的影响

见表1。水迷宫实验中,各剂量组小鼠到达终点的时间、到达终点前的错误次数方差齐,采用单因素方差分析,结果显示两者总体比较差异有统计学意义(P<0.05)。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较,发现高剂量组小鼠达终点时间较对照组显著缩短(P<0.05),到达终点前的错误次数较对照组显著减少(P<0.05)。采用χ2检验比较各剂量组和对照组动物2 min内到达终点的动物数,结果显示,高剂量组小鼠2 min内到终点的动物数显著多于对照组(P<0.05)。

2.2苁蓉总苷对小鼠避暗实验记忆的影响

见表2。避暗实验中,训练潜伏期、测验潜伏期、训练错误次数、测验错误次数均方差齐,采用单因素方差分析,结果显示四者总体比较差异均无统计学意义(P>0.05)。采用确切概率法比较各剂量组和对照组动物测验错误反应率,结果显示各剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。