肉苁蓉对负荷运动小鼠肝脏保护作用的探讨

赵锡安1,阎晓红2,侯金凤3,闫美荣2,刘东军1

(1.内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室,呼和浩特010021;

2..内蒙古医学院,呼和浩特010059;3.内蒙古工业大学检测中心,呼和浩特010051)

摘要:采用HE染色法、糖原染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究肉苁蓉对负荷运动小鼠肝组织、糖原及乳酸脱氢酶同工酶(LD H)活性的影响.结果显示负荷运动小鼠肝组织结构损伤严重,糖原减少、LD H5同工酶活性显著升高;服用肉苁蓉后负荷运动小鼠肝组织结构趋向正常,糖原丰富,LD H5同工酶活性明显下降.研究表明肉苁蓉可增加负荷运动小鼠肝糖原含量,降低LD H5同工酶活性,对肝脏具有保护作用.

关键词:肉苁蓉;糖原;乳酸脱氢酶同工酶;聚丙烯酰胺凝胶电泳法

中图分类号:Q954.6-33文献标识码:A

近几年的研究认为肉苁蓉可增强免疫功能〔1〕;促进记忆,提高智能;调节神经系统,提高性功能及抗衰老等作用〔2〕.它含有的D-甘露醇、壳甾醇、胡萝卜素等成份,具有保肝及助阳和增强活力的作用〔3〕.我们通过动物试验,对肉苁蓉进行了一系列研究,探讨了它对运动能力和疲劳恢复的作用.本文主要介绍肉苁蓉对负荷运动小鼠肝脏组织结构、糖原及乳酸脱氢酶同工酶活性的影响,为肉苁蓉在运动医学领域的应用提供科学的实验依据.

1材料

1.1动物

雄性健康小白鼠,由内蒙古大学实验动物研究中心提供(清洁级,许可证号码:SCX K(蒙)2002-0001).

1.2药物

肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)产于内蒙古额吉纳旗,并符合国家药典规定,使用前将生药制成15%的水煎液,灭菌备用.

1.3仪器

LD4-2离心机(北京医用离心机厂)、DY-W2型电泳仪(北京生化仪器厂)、UV P凝胶图象分析系统(美国)、OLYM PUS BX 40荧光显微镜、ATAGO切片机(日本).

试剂:乳酸脱氢酶同工酶试剂盒,内蒙古同日试剂有限公司.

2方法

2.1取40只小鼠,体重20～25 g,随机分为对照安静组、对照运动组、实验安静组和实验运动组各10只.对照组(对照安静组、对照运动组)灌胃服0.2 m L/日生理盐水;实验组(实验安静组和实验运动组)灌胃服肉苁蓉水煎液,日用量0.2 m L,药物浓度为3 g/kg体重,每日服药一次,连续给15日,末次给药1 h后将对照运动和实验运动两组小鼠尾部负重1 g,放入30±0.5℃水中游泳,以沉入水中不再浮起为竭力,取出后休息 10 h,之后连同对照鼠,用脱颈法迅速处死小鼠取出肝脏〔 4〕. 部分肝组织经10% 的福尔马林固定液固定、石蜡包埋做组织切片, HE染色及糖原染色,部分肝组织用生理盐水冲洗后, - 20℃冷冻保存.测定时室温解冻,用滤纸吸干后称重,取肝组织按 1∶ 9( g /m L)的比例在生理盐水中制备匀浆,离心( 3500 r /min, 4℃ , 15 min) ,取上清液- 20℃冷冻保存,用于乳酸脱氢酶同工酶活性测定.

2. 2 观察指标

2. 2. 1 肝组织形态学的观察 常规 HE染色和糖原染色 (高碘酸-Schiff试剂法) .

2.2. 2 乳酸脱氢酶同功酶的测定 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,样品的分离胶浓度为 7% , p H8. 9, 浓缩胶浓度为 4%   , pH6. 8. 10 uL样品与一滴甘油及溴酚蓝指示剂混合加样. 电极缓冲液为 Tris-甘氨酸( p H8. 7) ,电泳开始时电压为 100～ 150 V ,半小时后加到 200～ 250 V ,电泳 4 h〔5〕. 乳酸脱氢酶同工酶采用试剂盒染色, 37℃下染色 30 min,呈现出蓝色的乳酸脱氢酶同工酶谱带,然后用清水漂洗,冰

醋酸固定,用 UV P凝胶图象分析系统进行数据处理,实验数据用 -x± s 表示,进行t 检验,运用 SPSS软

件进行统计学分析.

3结 果

3.1 光镜观察组织形态及糖原的显示

对照安静组肝小叶结构清晰,细胞索排列整齐,肝窦正常,肝细胞无明显病变,核结构清晰, (见图

1) ; 对照运动组正常组织结构消失,肝小叶界限不清,细胞索紊乱,大部分肝窦消失.肝细胞广泛性的空泡变性,表现为细胞体积增大,胞浆疏松、浅染,乃至清亮、透明,部分肝细胞呈典型的气球样变,可 见少量灶性或点状坏死 (见图 2) ; 实验安静组肝小叶结构比对照安静组更为清晰,细胞核结构清晰,核膜、核仁、核质着色正常,细胞索排列整齐(见图 3) ; 实验运动组肝细胞呈轻度浊肿,排列较为紧密,细胞内无明显空泡及疏松,细胞索排列较整齐,细胞核结构较清晰(见图 4).

实验结果表明,对照运动组乳酸脱氢酶LD H5活性最高,表明肝细胞损伤最为严重;实验运动组肝细胞损伤相对较轻,且LD H5的活性明显低于对照运动组.进一步证实肉苁蓉对肝脏的保护作用,它能有效地清除剧烈运动后机体的代谢产物,能延缓疲劳的发生,亦能加速疲劳的消除.实验安静组与对照安静组相比,LD H5的活性明显偏低,其机理还需更多实验数据证明.

中药肉苁蓉作为营养补充品与运动能力相关的研究已被广泛开展〔12〕,在运动医学领域里肉苁蓉作为单方剂或复方剂被使用.有关肉苁蓉保护肝脏功能的作用机制还有待于进一步的研究.

参考文献:

[1]罗尚凤.肉苁蓉化学成分的研究[J].中药通报,1986,11(11):41.

[2]Lin LW,Hsieh M T,T sai F H,et al.A nti-nociceptiv e and a nti-inflammato r y activity caused by Cistanche deserti-cola in r odents[J].Ethnopharmacol,2002,83(3):177～182.

[3]O uyang J,Wa ng X,Zha o B,et al.Effects o f ra re ear th elements o n the g ro w th of Cistanche deserticola cells a nd th e pr oduc tion o f phenylethanoid g ly co sides[J].Biotechnol,2003,102(2):129～134.

[4]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,2000.[5]何忠效,张树政.电泳(第二版)[M].北京:科学出版社,2001.

[6]孙云,林安平,张洪泉.新疆肉苁蓉抗自由基损伤的研究[J].中国中药杂志,1994,19(7):433～435.

[7]张涛,刘朝阳,王建杰,等.肉苁蓉总苷对D-半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响[J].中国老年学杂志,2004,5:441～442.

[8]海力曼,依拉洪,邬利亚,等.肉苁蓉总苷对阿霉素所致小鼠心肌线粒体损害的保护作用[J].新疆医科大学学报,2004,27(2):128～130.