肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺一氧化氮及细胞凋亡的影响

孙云 徐峰 杨轩璇 王德俊 张洪泉

（扬州大学医学院药理学教研室，扬州 225001）

中国图书分类号R 282.71；R 977.7；R 914.3；R 329.25；R 339.38；R-332

文献标识码A文章编号1001-1978（2003）06-0683-04摘要目的研究肉苁蓉多糖（CDP）对肺衰老模型的细胞凋亡、一氧化氮（N。）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力的作用及作用机制。方法取2 mon龄小鼠常规条件下饲养11 mon,制成自然衰老模型,用CDP 25,50.100 mg•kg^分别灌服衰老小鼠6 wk,检测衰老小鼠血清及肺组织中NO浓度及SOD活性，借助荧光显微镜研究肺组织细胞凋亡的形态学变化。结果衰老可引起血清及肺组织SOD活性降低、NO含量升高,还可诱导肺组织细胞凋亡。CDP可以明显提高机体血清和肺的SOD活力、降低NO浓度，明显抑制了肺组织细胞凋亡，使细胞数减少，凋亡百分率（APO%）降低。结论CDP对衰老小鼠肺组织细胞的退行性变化具有改善或延缓作用。

关键词肺；衰老；一氧化氮；超氧化物歧化酶；凋亡

许多研究证实肉苁蓉具有抗氧化抗疲劳，延缓衰老的作用⑴。随着全球老龄化日趋严重，对衰老及抗衰老方面的研究已成为各国科学家研究的热点。肺组织直接与外界相通，并且接受来自全身的循环血液，最容易受到各种有害因素的攻击，是机体最先衰老的器官之一,为了深入探讨肉苁蓉多糖（cistanche desertica polysacchrides,CDP）在肺衰老中的作用及作用机制，我们制造了衰老模型并观察其对衰老模型的作用。

1材料和方法

1.1动物模型制备及实验设计2 mon龄清洁级ICR品系小鼠，18〜22 g,早舎各半，由扬州大学实验动物中心提供。随机分为5组。每天喂饲颗粒饲料、自由进水和更换垫料等，连续喂养11 mon,造成小鼠自然衰老模型之后，衰老模型小鼠分别灌胃CDP〈由南京野生植物研究所提供，蒸懐水配制成1.25,2.5,5.0 g•L~i）,按25,50.100 mg-kg1•cP'分为低剂量、中剂量和高剂量组，连续给药61.2方法

1.2.1样本采集及测定各小鼠末次给药后1 h,摘眼球取血，分离血清备用；处死小鼠，迅速取出肺组织，用冷生理盐水清洗表面血迹并用滤纸吸干，加入冷生理盐水，玻璃匀浆器研磨制备成10%的肺组织匀浆，1 500 r-min^1 4°C离心10 min,取上清备用。分别按黄嘿吟氧化酶法测定肺组织匀浆和血清中的超氧化物歧化酶（SOD）活力（UV755B型紫外分光光度计，上海分析仪器厂产品）；按试剂盒方法（试剂盒均由南京聚力生物工程公司提供）测定肺组织匀浆和血清中的一氧化氮（NO）浓度。

处死小鼠后，另取部分肺组织，清洗去净表面血迹后，眼科剪剪碎肺组织，用4层纱布过滤，除去纤维组织，得细胞悬液，调整细胞浓度为5X108〜5X 10*L-L严格按照试剂盒（北京宝赛生物制品公司提供）说明书操作，用荧光显微镜（OPTIPHOT-2,日本尼康）观察。每张细胞涂片观察5个视野，观察细胞凋亡情况。

1.2.2凋亡形态学观察取100/1细胞悬液均匀涂于玻片上，室温晾干,甲醇固定。玻片上滴加瑞士染液，室温染色3 min,用水轻轻漂洗染液，室温晾干。二甲苯浸泡3 min除去杂质，最后树脂封片。普通光学显微镜观察200个细胞计数凋亡细胞所占百分率。

1.3统计学处理结果以須士s表示，两样本均数比较釆用t检验。

2结果

2.1CDP对衰老小鼠NO含量的影响结果显示，血清和肺组织中，衰老模型小鼠体内的NO浓度增高，CDP治疗组N。含量较模型组为低（P<0.01）；高剂量组N。含量低于中、低剂量组（P<0.05）,与青年对照组基本接近。CDP各剂量组的肺组织中NO含量与衰老模型组相比，具有降低的趋势，中剂量组差异有显著性（PV0.05）,高剂量组差异也有显著性（P<0.01）,结果见Tab lo

2.2CDP对衰老小鼠血清及肺组织SOD活力的影响结果显示，在血清和肺组织中’袤老小鼠的SOD含量明显低于CDP中剂量组和高剂量组(FV 0.01),用药组与对照组之间有差异，但高剂量组基本接近对照组；高剂量组SOD含量也高于低剂量组(PV0.05).见Tab 2。