肉苁蓉总苷体外清除自由基及对OH·引发的DNA损伤的保护作用

王晓雯1,蒋晓燕1,邬利娅·伊明1,王雪飞1,阿不都热衣木·玉苏甫2

(1.新疆医科大学药理教研室,新疆乌鲁木齐,830054;2.新疆维吾尔医研究所自由基室,新疆乌鲁木齐830001)

摘要:目的研究肉苁蓉总苷体外清除自由基作用及对OH·引起的DNA损伤的保护作用。方法采用现代生物化学发光技术,检测肉苁蓉总苷对O2· , OH·, H2O2 , 1O2等自由基的清除作用。并通过Cu2+-Phen-H O-VitC-DNA发光体系研究肉苁蓉总苷对OH·引起的DNA氧化损伤的保护作用。结果肉苁蓉总苷对O·,OH·,H O,1O活性氧自由基均有清除作用。其50抑制浓度(IC50)分别为0.0731,7.031,0.098,0.1254 mg·mL-1。对DNA化学发光的IC50为0.4211μg·mL-1。结论实验结果表明,肉苁蓉总苷能有效地清除各种活性氧自由基,能保护OH·引发的DNA氧化损伤。

关键词:肉苁蓉总苷;自由基;DNA损伤

中图分类号:R966;文献标识码:A;文章编号:1001-2494(2001)01-0029-04

肉苁蓉Cistanche salsa(C.A.Mey)G.Beek。有补中益气、益精、壮阳之功效,据文献报道肉苁蓉可增强机体免疫力[1],有延缓衰老[2]等作用。我室研究发现肉苁蓉总苷(glycosides of Cistanche,GCs)对小鼠组织的抗氧化作用及显著降低组织脂褐质含量[3];对大鼠心肌缺血的保护作用[4];并具有抗脂质过氧化和抗辐射作用[5]。作者用化学发光法检测GCs的体外清除自由基作用及对OH·引发的DNA氧化损伤的保护作用,以探讨其抗心肌缺血和抗辐射作用的机制。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1药物肉苁蓉总苷由新疆医科大学药学院

植化室按日本文献(公开特许公板(A)昭63-198627)方法,从北疆产盐生肉苁蓉[Cistanche salsa(C.A.Mey)G.Beek]中提取,主要成分为苯乙醇苷类。

1.1.2试剂黄嘌呤氧化酶,次黄嘌呤,酵母多糖,鲁米诺(luminol),小牛胸腺DNA、邻菲罗啉(Phen)均为Sigma公司产品,其余所需试剂均为国产分析纯。1.1.3仪器SHG-1型生物化学发光测定仪(上海市检测技术所检测仪器厂),HY-4调速多用振荡器(江苏医疗仪器厂),PHS-25型pH计(上海雷磁仪器厂)。

1.2方法

1.2.1超氧阴离子自由基(O·)的测定以黄嘌呤氧化酶-次黄嘌呤-鲁米诺发光体系产生O·,按文献[6]方法测定。向各测量管中分别加入不同浓度的样品液100μl,空白对照管加100μl磷酸钾缓冲液,然后各管加入次黄嘌呤800μl,鲁米诺50μl,测本底发光强度10 s,最后注入黄嘌呤氧化酶50μl,启动发光反应,连续测定扩增的发光强度10 s至出现峰值,根据各样品的抑制率求出抑制发光强度50的样品浓度,即IC50值。

1.2.2羟自由基(OH·)的测定以VitC-CuSO4-酵母悬液-H2O 2发光体系产生OH·,按文献[6]方法测定,由测量管中分别加入0.3 mg·mL-1 VitC 200μl,0.45 mg·mL-1 CuSO4 400μl,酵母菌200μl(加时摇匀),然后分别加入不同浓度的样品液600μl,空白对照管加600μl磷酸钠缓冲液,分别测定各管本底发光浓度10 s,最后注入1的H2O2600μl,摇匀,启动发光反应,连续测定发光强度10 s,至出现峰值,求出IC50值。

具体研究见以下图片：

参考文献

[1]高海谦.增强免疫功能的中草药[J].中成药研究,1984,11(11):34.

[2]李巧如,李石蓝.肉苁蓉抗衰老作用的实验研究[J].上海中医药杂志,1990,5(4):7.

[3]王晓雯,李琳琳,木胡牙提,等.肉苁蓉总苷对小鼠组织的抗氧化作用[J].中国中药杂志,1998,23(9):554.

[4]毛新民,王晓雯,李琳琳,等.肉苁蓉总苷对大鼠心肌缺血的保护作用[J].中草药,1999,30(2):118.

[5]李琳琳,王晓雯,王雪飞,等.肉苁蓉总苷的抗脂质过氧化作用及抗辐射作用[J].中国中药杂志,1997,22(6):364.